Western blot of technique standardization of the diagnosis of human fasciolosis using Fasciola hepatica excreted-secreted antigens
Estandarización de la tecnica de Western blot para el diagnóstico de la fasciolosis humana utilizando antigenos de excreción-secreción de Fasciola hepatica
Objectives. To evaluate the performance of the enzyme-linked immunoelectrotransfer blot assay (EITB, Western blot) using excretory/secretory antigens from adult forms of Fasciola hepatica (Fh E/S Ag) for the diagnosis of human fasciolosis. Materials and methods. Antigens were obtained after 18 hours of incubation in culture medium Minimum Essential Eagle, prepared at a protein concentration of 0.15 ug/uL and run against a pool of sera of patients with proven fasciolosis (confirmed by the finding of parasite eggs in the stool microscopy). Antigens of 10, 12, 17, 23, 27, 30, 36, 43, 66 and 136 kDa were detected and used to develop the Western blot technique. The sensitivity was evaluated using sera from 67 fasciolosis patients, and the specificity using sera from 57 patients with other parasitic diseases, and 10 from healthy individuals. Results. Out of the 67 sera, 64 reacted with the 23 kDa band and 61 with the one of 17 kDa. These two bands were not detected in sera from patients with other parasitic diseases or in those from healthy volunteers and thus could be considered specific and diagnostic. Conclusions. The sensitivity of the test, using the bands of 17 and 23 kDa, was 95.5% for positive reactions to at least one of these two bands, being its specificity 100% with a positive predictive value of 100% and negative predictive value of 95.71%.
Objetivos. Identificar las especies de Leishmania presentes en las lesiones cutáneas del paciente y en las Lutzomyias que cohabitan en las áreas endémicas de la región La Libertad en el Perú. Materiales y métodos. Se usaron métodos moleculares basados en PCR y RFLP lo cual permitió obtener datos eficientes con poca muestra (pequeños especímenes), debido a su alta sensibilidad y las facilidades de aplicación en el trabajo de campo. Resultados. Los resultados del PCR de pacientes y de vectores, mostraron la presencia de Leishmania (V.) peruviana como principal agente causal de la Leishmaniosis tipo andina, transmitidas por Lutzomyia peruensis. Así mismo, se reveló la presencia de Leishmania (V.) guyanensis en Lutzomyia ayacuchensis. Conclusiones. Se mostró la presencia de L. (V.) peruviana y L. (V.) guyanensis en las áreas andinas en estudio. Hallazgos que exigen realizar una investigación más amplia sobre la distribución geográfica de L. (V.) guyanensis y las características clínicas relacionadas con la infección en áreas endémicas de Leishmaniosis cutánea.